Eukalyptusolje er eterisk olje fremstilt av bark og blad av forskjellige arter i planteslekten Eucalyptus, særlig av E. globulus.
Oljen utvinnes ved destillasjon med vanndamp og inneholder inn til 70 prosent eukalyptol, dessuten noen alkoholer og aldehyder av valeriana-, kapron- og smørsyre. De virksomme stoffene i oljen varierer mye fra art til art.
Eukalyptusolje brukes i teknikk og medisin, blant annet for å lindre snue og bronkitt. Halspastiller kan inneholde eukalyptusolje.
Eukalyptusolje har antibakterielle egenskaper og er under uttesting som insektmiddel.